Studi Pembuatan Pustaka Genom Bacillus sp. BAC4 Menggunakan Vektor pHB2O1 dan pUC19, dan Set Inang E. coli JM1O1

Tahun 2000 Volume 35 Nomor 3
Oleh : Pratama Jujur Wibawa, Enny Ratnaningsih, Maelita R. Moeis, Oei Ban Liang

Pembuatan pustaka genom Bacillus sp. BAC4 telah dipelajari dengan menggunakan vektor pHB2Ol (6,593 kb, emr cmr) dan pUC19 (2,69 kb, ampr). Plasmid rekombinan yang diperoleh digunakan untuk mentransformasi sel inang E . coli JM101 secara in situ. Transformasi E. coli JMIOI dengan pl-1B201 rekombinan dihasilkan klon rekonibinan sekitar 15.000 klon, sedangkan trans formasi sel inang tersebut dengan pUC19 rekombinan hanya dihasilkan klon rekombinan sekitar 630 klon. Seleksi dan analisis sejumldh klon rekombinan yang dipilih secara acak nwnunjukkan bahwa sebagian besar klon rekombinan adalah tidak independen. Diperkirakan klon independen yang diperoleh dan plIB2Ol rekombinan hanya sekitar 6,5% dengan DNA insert berukuran sekitar 5,58-8,25 kb. Sementara itu, klon independen yang diperoleh dari pUC19 adalah sekitar 30% dengan DNA insert berukuran sekitar
0,3-3,0 kb.

The genomic library construction of Bacillus sp. BAC4 hove been studied with pHB201(6,593 kb, emr cmr and pUC19 (2,69 kb, ampr) vector. Recombinant plasmids formed were used to transform E. coil JMIOI host cells by mean in situ. Transformation of E. coli JMIOI with recombinant pHB2OI were resulted recombinant clones of about /5,000 clones, while transformation of the host cells with recombinant pUCI9 were resulted recombinant clones only about 630 clones. Selection and analysis some recombinant clones which were selected randomly indicated that the most recombinant clones were not independent. It was predicted that the independent clones resulted from recombinant pHB201 only about 6,5% with DNA insert about 5,58-8,25 kb in size. The independent clones resulted from recombinant pHB19 were about 30% with DNA insert about 0,3-3,0 kb in size.